质谱测试流程
1. 制样送样前务必先来生物站C105沟通细节,以免样品不合规不能分析或影响分析结果,未按标准方法处理样品引起的对平台仪器的损害,课题组需承担机时和仪器维修的责任。
2. 沟通后登陆伟德betvlctor体育官方网站大型仪器平台进行送样预约,详细填写送样信息。
3. 每周一10:00送样,样品周二开始制备和分析;因特殊原因周一上午未能送样,可在周四10:00送样,样品下周二制备。电子版质谱分析样品登记表发送至邮箱 nkzppt@163.com,纸质版导师签字随样品一起送至C105。
4. 仪器状态正常,2周内出结果。结果发送至邮箱,可自行下载,如需原始数据请先联系仪器负责人,按照约定时间到生科院C105拷取数据。需自备格式化后的U盘。
5. 保存好原始数据,质谱平台电脑数据保存两个月后将会删除。
6. 有相关问题,可以在南开生科院质谱平台微信群中提出,或联系邮箱nkzppt@163.com。
送样单填写要求
1. 所有送样样品均需要附胶图和预估含量(参考附图1),附上参考信息,例如定量Bradford/BCA定量值;IP 样品需Western Blot图以便证明IP实验是否成功。
2. 所有溶液内样品应写明所用buffer的具体成分,以便制样时参考。
3. 所有胶内样品样品胶体积不易过大:短胶样品体积100 μl以下为宜;单条带染色胶内样品体积20-30 μl及以下为宜。若体积过大影响结果自行承担。跑胶建议隔开上样,两个样品之间隔一个空白泳道。
4. 跑短胶参考示意图:
跑短胶原则:预染marker最大的条带跑进分离胶1mm时停止跑胶,此时浓缩胶与分离胶分界线距Marker下沿约0.5cm,降低电压跑胶(80-100 V),不染色
5.送样单上注明分析要求、拷贝搜库fasta文件、定量需要、是否分开或合并原始数据进行搜库等。
附图1:样品考染/银染参考图。
样品处理注意事项
1. 蛋白胶染色不要用重复使用过的染液,一定要用新的染液
2. 配置脱色液、buffer或清洗容器,要用质谱级试剂,至少要用ddH2O
3. 实验过程中用到的容器、皿、刀片尽量要用新的,按照ddH2O-异丙醇-ddH2O顺序清洗
4. 禁止用洗洁精、洗衣粉等洗剂清洗实验过程中所用的容器,样品中禁止使用含有SDS、Triton、Tween成分,因此导致的机器污染要做出相应赔偿
5. 处理过程中避免对着蛋白胶或样品说话,使用新的手套,避免直接触碰到样品胶条,不得已可以触碰胶的空白处
6. 胶内样品切胶尽量避免切到空白胶,减小胶体积。以免体积过大影响酶切效率。
7. 胶条放到离心管,加入20微升质谱级水(或ddH2O),防止胶条过干。